荧光定量PCR
实验原理
在进行基因功能研究时，我们通常会通过观察靶基因的表达量变化来判断目的基因或药物等对细胞的影响。靶基因的表达量变化可以通过在mRNA和蛋白水平进行检测。蛋白水平通常使用WesternBlotting方法进行（详见WB检测服务目录），而在mRNA水平有多种方法进行检测，比如反转录PCR和荧光定量PCR（RT-qPCR）等。荧光定量PCR方法由于其可以准确快速的对多个基因进行精确定量而得到广泛的应用。该方法是一种基于普通PCR的改进方法，在PCR扩增的过程中利用具有DNA亲和性的荧光染料或荧光标记的核苷酸探针，每个循环收集一次荧光强度信号。通过荧光强度的强弱反应扩增片段的丰度。随着PCR反应中目的片段含量的增加，荧光信号强度也等比例增强。从而实现对起始模板定量及定性的分析。这种方法比普通的反转录PCR能更加直观的反应产物含量的多少给出定量的结果。
服务内容
一、核酸提取
使用试剂盒或者Trizol法对哺乳动物细胞和组织，植物，酵母，真菌，细菌和土壤等样品中的RNA和DNA进行提取。并对提取的样品进行浓度和纯度的检测，作为后续检测用模板。
二、RNA的反转录
与可以进行直接检测的DNA样品不同，RNA样品需要进行反转录为cDNA来进行进一步检测。我们首先使用进口的DNase对RNA样品进行处理，消除基因组DNA对后续检测的干扰，再使用进口反转录试剂盒或者反转录酶对RNA样品进行高效的反转录，使得微量表达的样品也能进行很好的扩增。
三、荧光定量PCR检测基因表达量
根据检测目的的不同，荧光定量PCR可以分为相对荧光定量PCR和绝对荧光定量PCR两种。每种定量方法中根据检测标志物的不同分为染料法和探针法。较为常用的染料是SYBRGreen，其能够与DNA高度特异性的结合，具有很高的灵敏度。对于低表达量的样品或特殊样品，我们建议使用探针法进行检测。根据目的序列设计一条寡核苷酸探针，再标记上荧光基团，能够极大的增加检测灵敏度和特异性。可以检测低至个位数的目的基因样品。
四、特殊方法对待特殊样品
我们拥有十年以上的核酸提取经验，对于特殊样品，如土壤。我们优化了传统的Trizol方法，能够高效的提取高纯度的核酸样品，可满足后续荧光定量和高通量测序的需求。对于核酸含量很少的样品，如拭子，环境水样等。我们使用特殊的富集方法将样品浓缩以减少样品损失，再利用公司独特的提取方法最大限度的提取样品中的核酸，能够满足后续的检测需求。此外，对于其它无可参考方法的样品，我们可以根据经验创造属于它的个性提取方法。
五、我们免费提供
（1）引物和探针的设计，以及引物的合成；
（2）绝对定量和相对定量选择的咨询和建议；
（4）核酸定量；
（5）内参基因的检测；
（6）数据统计和分析；
（7）其它我们荧光定量PCR相关的能帮助到您的任何问题；
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