首页 -> 细胞功能学实验 -> 细胞增殖 -> CCK8细胞增殖实验
实验一:细胞活性检测
1、在96孔板中接种细胞悬液(100μL/孔),同样的样本可做4-6个重复。将培养板放在培养箱中预培养(37℃,5% CO2)。
2、向每孔加入10 μL CCK8溶液(注意不要在孔中生成气泡,它们会影响OD值的读数)。
3、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。细胞种类不同,形成的Formazan的量也不一样。如果显色不够的话,可以继续培养,以确认最佳条件。
4、用酶标仪测定在450nm-490nm处的吸光度。
5、若暂时不测定OD值,可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定,吸光度不会发生变化。
实验二:细胞增殖-毒性检测
1、在96孔板中配置100μL的细胞悬液。同样的样本可做4-6个重复,将培养板在培养箱预培养24小时(37℃,5% CO2)。
2、向培养板加入10μL不同浓度的待测物质。
3、将培养板在培养箱孵育一段适当的时间(例如:6、12、24或48小时)。
4、向每孔加入10μL CCK8溶液(注意不要再孔中生成气泡,它们会影响OD值的读数)。
5、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。细胞种类不同,形成的Formazan的量也不一样。如果显色不够的话,可以继续培养,以确认最佳条件。
6、用酶标仪测定在450nm-490nm处的吸光度。
7、若暂时不测定OD值,可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定,吸光度不会发生变化。
注意:如果待测物质有氧化性或还原性的话,可在加CCK之前更换新鲜培养基(除去培养基,并用培养基洗涤细胞两次,然后加入新的培养基),去掉药物影响。当然药物影响比较小的情况下,可以不更换培养基,直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。
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