发布时间:2019-08-31 浏览次数: 次
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包装 |
价格 |
oligo1002 -1ml oligo1002-1.5ml |
1ml 1.5ml |
1200元 1500元 |
冰袋运输,4℃存放一年以上。
下列步骤适用于24孔板培养的哺乳动物细胞,至于其他培养材料,请参考转染规模调整,所有数量和体积均是按孔计算。大部分细胞系所使用的DNA(ug)与LipoX Plus Reagent(uL)的比值为1:2到1:3,转染高密度细胞可获得高转染效率、高表达水平和低细胞毒性。
A.贴壁细胞:转染前一天每孔0.5-2×105个细胞接种于500ul不含抗生素的培养基中,在转染时细胞可长至 70-90%汇合度
悬浮细胞:在配制转染液前每孔4-8×105个细胞接种于500ul不含抗生素的培养基中。
B.转染液制备,每孔细胞用量如下:
①用50ulOpti-MEM低血清培养基(或者其他无血清培基)稀释质粒DNA,轻轻混匀。
②使用前轻轻摇匀LipoX Plus Reagent,然后取适量LipoX Plus在50ul Opti-MEM培养基中稀释,室温孵育5min。
注意:请在 25 min 内进行下一步操作。
③将前两步所稀释的 DNA 和LipoX Plus Reagent混合(使总体积为 100 ul),轻轻混匀, 室温放置 20 min(溶液可出现浊)。
注意:转染复合物常温下可在 6 h 内保持稳定。
C.在每孔细胞中加入100 ul转染液。
D.按照1:1000的比例加入转染增强液,轻轻摇匀。
E.37℃培养18-48 h后检测基因表达,转染4-6 h后可更换培养基。
培养材料 |
接种培养基 |
稀释用Opti-M EM |
DNA 转染 |
|
DNA |
Lipo |
|||
96孔板 |
100uL |
2×25 ul |
0.2 μg |
0.5 ul |
24孔板 |
500 ul |
2×50 ul |
0.8 μg |
2.0 ul |
12孔板 |
1mL |
2×100 ul |
1.6 μg |
4.0 ul |
6孔板 |
2mL |
2×250 ul |
4.0 μg |
10 ul |
60mm |
5mL |
2×0.5 m L |
8.0 μg |
20 ul |
10cm |
15mL |
2×1.5 m L |
24 μg |
60 ul |
1.使用高纯度的DNA 或RNA有助于获得较高的转染效率。
2.转染前细胞必须处于良好的生长状态。
3.需自备不含抗生素的无血清培养液或 Opti-MEM®培养液或普通的DMEM培养液。
4.LipoX Plus Reagent转染试剂不能vortex 或离心,宜缓慢晃动混匀。
5.LipoX Plus Reagent转染试剂使用后请立即盖好盖子,避免长时间暴露在空气中,影响转染效率。